İnsan İmmün Yetmezlik Virüsü için İnsan Anti HIV 1&2 Elisa Test Kiti

3. TEST PROSEDÜRÜ

• Kullanmadan önce tüm bileşenlerin oda sıcaklığına gelmesini bekleyin.Konsantre yıkama tamponunu ddH2O ile 1:20 oranında seyreltin.
• İki pozitif ve üç negatif kontrol ayarlayın.100μl Pozitif Kontrolü (HIV-1 ve HIV-2) ve Negatif Kontrolü iki kopya halinde numune seyrelticisi olmadan ilgili kuyucuklara dağıtın.Herhangi bir sıvı eklemeden arka plan kontrolü olarak bir boşluk ayarlayın.Her test kuyusuna 50μl örnek seyreltici ekleyin, test kuyularına 50 μl test serumu veya plazma ekleyin iyice karıştırın.
• Mikrotitre plakasını nemlendirilmiş bir kutuya yerleştirin ve 37°C'de 30 dakika inkübe edin.
• Reaksiyon solüsyonunu atın ve her kuyucuğa 350μl seyreltilmiş yıkama tamponu ekleyin.15-30 saniye beklettikten sonra yıkama tamponunu atın.Yıkama prosedürünü 5 kez tekrarlayın ve ardından tüm suyu çıkarmak için plakayı kuvvetlice ters çevirin ve emici kağıt üzerinde kuyuların kenarlarını birkaç saniye tıkayın.
• Her kuyucuğa 100μl Enzim Konjugatı ekleyin.Mikrotitre plakasını düz bir bankta 1 dakika döndürerek hafifçe karıştırın.Boş kuyuya Enzim Konjugatı eklemeyin..
• Mikrotitre plakasını nemlendirilmiş bir kutuya yerleştirin ve 37°C'de 30 dakika inkübe edin.
• Her kuyuyu seyreltilmiş 1X yıkama tamponu ile doldurarak, ardından tüm suyu çıkarmak için plakayı kuvvetlice ters çevirerek ve kuyuların kenarlarını birkaç saniye emici kağıt üzerinde tıkayarak her kuyuyu 5 kez yıkayın.
• Her kuyuya 50μl Substrate Solution A (HRP substrat) ekleyin, ardından her kuyuya 50μl Substrate Solution B (TMB) ekleyin.Yavaşça karıştırın ve 37°C'de 15 dakika inkübe edin.
• Renk reaksiyonunu durdurmak için her kuyucuğa bir damla (50μl) Durdurma Solüsyonu ekleyin.
• Çift filtre plakası okuyucu ile 450 nm/630 nm'de OD değerini okuyun.OD değerini 450 nm'de tek filtre plakası okuyucu ile okumak opsiyoneldir.(tüm kuyulardan gelen tüm OD okumalarını düzeltmek için kör kuyunun OD değerini kullanarak