EBV-VCA IgA Ab Testi ELISA Kiti Enzim İmmünoassay Testi Plazma Örneği

EBV-VCA IgA Ab ELISA Kit Katalog No.: BE501A
Epstein-Barr Virüsünün (EBV) viral kapsid antijenine (VCA) karşı IgA antikorunun saptanması için enzim immünolojik testi.
 
1. TESTİN PRENSİBİ
EBV-VCA IgA Ab ELISA Kiti, mikroplaka kuyularının yüksek oranda antijenik bir segment EBV-VCA'ya karşılık gelen rekombinant antijen ile kaplandığı bir saptama sistemi kullanır.Kuyulara serum veya plazma numuneleri, kontroller eklenir.İnkübasyon sırasında, numunede bulunan EBV-VCA'ya özgü IgA antikorları, mikroplaka kuyularına sabitlenmiş rekombinant antijene bağlanacaktır.Kuyucuklar, bağlanmamış malzemeleri çıkarmak için yıkanır ve anti-insan IgA peroksidaz konjugatı, antijen-antikor kompleksine bağlanır ve fazla bağlanmamış enzim konjugatları, yıkama yoluyla tekrar çıkarılır.Enzim substratı, tetrametilbenzidin (TMB), inkübasyon üzerine eklenir, substrat bağlı enzim tarafından hidrolize edilir ve EBV-VCA IgA antikorları içeren kuyucuklarda mavi veya mavi-yeşil bir renk gelişir.Enzim reaksiyonu, sülfürik asit ilavesiyle durdurulur.Geliştirilen rengin yoğunluğu 450 nm'de (450 nm/630 nm) spektrofotometrik olarak okunur ve numunede bulunan antikor miktarıyla orantılıdır.
REAKTİFLER
 
2. Kitlerle birlikte verilen malzemeler:

 
3. TEST PROSEDÜRÜ

1. Kullanmadan önce ELISA Kitini (tüm reaktifler) ve Örnekleri oda sıcaklığına getirin (yaklaşık 30 dakika).
2. Konsantre yıkama tamponunu ddH2O ile 1:19 oranında seyreltin.Örneğin, 5 ml yıkama tamponu konsantresi, deiyonize veya damıtılmış su ile toplam 100 ml hacme seyreltilmelidir.
3. Her test için arka plan kontrolü olarak bir boşluk, iki pozitif ve üç negatif kontrol ayarlayın.Bireysel kuyucuklara 100 ml pozitif kontrol ve negatif kontrol kopyası dağıtın.Kör kuyuya ne numuneler ne de HRP-Konjugat eklenmemelidir.
4. 100 ml Örnek Seyreltmeyi kontroller dışında ayrı test kuyucuklarına dağıtın.
5. Test kuyucuklarına her test örneğinden 10 ml ekleyin;karıştırmak için girdap.
6. 37°C'de 30 dakika inkübe edin
7. Her kuyuyu seyreltilmiş yıkama tamponu ile doldurarak, ardından tüm suyu çıkarmak için plakayı kuvvetlice ters çevirerek ve kuyuların kenarlarını birkaç saniye emici kağıt üzerinde tıkayarak her kuyuyu 5 kez yıkayın.
8. Her kuyucuğa 100ml Enzim Konjugatı ekleyin.Mikrotitre plakasını düz tezgah üzerinde 1 dakika döndürerek hafifçe karıştırın.Boş kuyuya Enzim Konjugatı eklemeyin.
9. 37°C'de 20 dakika inkübe edin
10. Plakayı adım 7'deki gibi 5 kez yıkayın.
11. Her kuyucuğa bir damla (50ml) Substrate Solution A (HRP-substrat) ekleyin, ardından her kuyucuğa bir damla (50ml) Substrate Solution B (TMB) ekleyin.Yavaşça karıştırın ve 37°C'de 30 dakika inkübe edin..
12. Renk reaksiyonunu durdurmak için her kuyucuğa bir damla (50 ml) Durdurma Solüsyonu ekleyin.Çift filtre plakası okuyucu ile 450 nm/630 nm'de OD değerini okuyun.OD değerini 450 nm'de tek filtre plakası okuyucu ile okumak opsiyoneldir.(tüm kuyulardan gelen tüm OD okumalarını düzeltmek için kör kuyunun OD değerini kullanarak)