Mouse E Cad E Cadherin Elisa Kit Araştırma Sadece Sandviç Yöntemini Kullanın

Fare E-Cadherin,E-Cad ELISA Kiti

Bu ELISA kiti, yöntem olarak Sandwich-ELISA'yı kullanır.Bu kitte sağlanan Microelisa şerit plakası, E-Cad'e özgü bir antikorla önceden kaplanmıştır.Standartlar veya numuneler uygun Microelisa stripplate kuyularına eklenir ve spesifik antikorla birleştirilir.Daha sonra, E-Cad'e özgü bir Horseradish Peroxidase (HRP)- konjuge antikoru, her Microelisa stripplate kuyusuna eklenir ve inkübe edilir.Serbest bileşenler yıkanır.TMB substrat solüsyonu her kuyuya eklenir.Yalnızca E-Cad ve HRP konjuge E-Cad antikoru içeren kuyucuklar mavi renkte görünecek ve durdurma solüsyonunun eklenmesinden sonra sarıya dönecektir.Optik yoğunluk (OD), 450 nm dalga boyunda spektrofotometrik olarak ölçülür.OD değeri, E-Cad konsantrasyonuyla orantılıdır.Numunelerin OD'sini standart eğriyle karşılaştırarak numunelerdeki E-Cad konsantrasyonunu hesaplayabilirsiniz.

Kitle birlikte verilen malzemeler

prosedür

Standartların Seyreltilmesi

1. Bir Microelisa şerit plakasında standartlar için on kuyu ayarlanmıştır.Kuyu 1 ve Kuyu 2'de 100μl Standart solüsyon ve 50μl Standart Seyreltme tamponu eklenir ve iyice karıştırılır.Kuyu 3 ve Kuyu 4'te, sırasıyla Kuyu 1 ve Kuyu 2'den 100 ul solüsyon eklenir.Daha sonra 50μl Standart Seyreltme tamponu eklenir ve iyice karıştırılır.Kuyu 3 ve Kuyu 4'ten 50μl solüsyon atılır. Kuyu 5 ve Kuyu 6'da sırasıyla Kuyu 3 ve Kuyu 4'ten 50μl solüsyon eklenir.Daha sonra 50μl Standart Seyreltme tamponu eklenir ve iyice karıştırılır.Kuyu 7 ve Kuyu 8'de, sırasıyla Kuyu 5 ve Kuyu 6'dan 50 ul solüsyon eklenir.Daha sonra 50μl Standart Seyreltme tamponu eklenir ve iyice karıştırılır.Kuyu 9 ve Kuyu 10'da, sırasıyla Kuyu 7 ve Kuyu 8'den 50 ul solüsyon eklenir.Daha sonra 50μl Standart Seyreltme tamponu eklenir ve iyice karıştırılır.50μl solüsyon Kuyu 9 ve Kuyu 10'dan atılır. Seyreltmeden sonra, tüm kuyulardaki toplam hacim 50μl'dir ve konsantrasyonlar sırasıyla 24ng/ml,16 ng/ml,8 ng/ml,4ng/ml ve 2ng/ml'dir. .

2. Microelisa stripplakasında boş kontrol olarak bir kuyuyu boş bırakın.Numune kuyularına 40μl Sample dilution buffer ve 10μl numune eklenir (seyreltme faktörü 5'tir).Numuneler kuyu duvarına değmeden dibe yüklenmelidir.Hafif sallayarak iyice karıştırın.

3. İnkübasyon: Kapatma plakası membranı ile mühürlendikten sonra 37°C'de 30 dakika inkübe edin.

4. Seyreltme: konsantre yıkama tamponunu damıtılmış suyla seyreltin (96T için 30 kez ve 48T için 20 kez).

5. Yıkama: Kapatma plakası membranını dikkatlice soyun, aspire edin ve yıkama solüsyonunu tekrar doldurun.30 saniye dinlendirdikten sonra yıkama solüsyonunu atın.Yıkama işlemini 5 kez tekrarlayın.

6. Kör kontrol kuyusu dışındaki her kuyucuğa 50 µl HRP-Konjugat reaktifi ekleyin.

7. Adım 3'te açıklandığı gibi inkübasyon.

8. Adım 5'te açıklandığı gibi yıkama.

9. Boyama: Her kuyuya 50 µl Kromojen Solüsyon A ve 50 μl Kromojen Solüsyon B ekleyin, hafifçe çalkalayarak karıştırın ve 37°C'de 15 dakika inkübe edin.Lütfen boyama sırasında ışıktan kaçının.

10. Sonlandırma: reaksiyonu sonlandırmak için her kuyucuğa 50 µl durdurma solüsyonu ekleyin.Kuyudaki renk maviden sarıya değişmelidir.

11. Bir Mikrotiter Plaka Okuyucusu kullanarak 450 nm'de absorbans OD'yi okuyun.Kör kontrol kuyusunun OD değeri sıfır olarak ayarlanır.Durdurma solüsyonu eklendikten sonra test 15 dakika içinde yapılmalıdır.

Kesinlik

Test İçi Kesinlik (Test içinde kesinlik): Düşük, orta ve yüksek seviyeli E-Cad'li 3 numune sırasıyla bir plaka üzerinde 20 kez test edilmiştir.

Testler Arası Kesinlik (Testler arası kesinlik): Düşük, orta ve yüksek seviyeli E-Cad'li 3 numune, her bir plakada 8 tekrar olmak üzere 3 farklı plaka üzerinde test edilmiştir.

CV(%) = SD/ortalamaX100

Test İçi: CV<%10

Testler Arası: CV<12%

Test aralığı

0.6pg/ml -80pg/ml

Duyarlılık:

0.1 pg/ml