Sıçan Estradiol, E2 ELISA Kiti
Notlar:
- Numune alımı ve ELISA testi, numune alımından sonra mümkün olan en kısa sürede yapılmalıdır.Numuneler ilgili literatüre göre çıkarılmalıdır.ELISA testi hemen gerçekleştirilemezse, numuneler -20°C'de saklanabilir. Tekrarlanan donma-çözülme döngülerinden kaçınılmalıdır.
- Kitlerimiz, HRP aktivitesini engelleyebilecek NaN3 içeren numuneler için kullanılamaz.
Kitle birlikte verilen malzemeler
| |
Kitle birlikte verilen malzemeler |
48 tespit |
96 tespit |
Depolamak |
| 1 |
Kullanım kılavuzu |
1 |
1 |
RT |
| 2 |
Kapatma plakası membranı |
2 |
2 |
RT |
| 3 |
Mühürlü çantalar |
1 |
1 |
RT |
| 4 |
Mikroelisa şerit plakası |
1 |
1 |
2-8℃ |
| 5 |
Standart: 180 sayfa/ml |
0.5ml × 1 şişe |
0.5ml × 1 şişe |
2-8℃ |
| 6 |
Standart seyreltici |
1.5ml × 1 şişe |
1.5ml × 1 şişe |
2-8℃ |
| 7 |
HRP-Konjugat reaktifi |
3ml × 1 şişe |
6ml × 1 şişe |
2-8℃ |
| 8 |
Örnek seyreltici |
3ml × 1 şişe |
6ml × 1 şişe |
2-8℃ |
| 9 |
Kromojen Çözümü A |
3ml × 1 şişe |
6ml × 1 şişe |
2-8℃ |
| 10 |
Kromojen Çözeltisi B |
3ml × 1 şişe |
6ml × 1 şişe |
2-8℃ |
| 11 |
Çözümü Durdur |
3ml × 1 şişe |
6ml × 1 şişe |
2-8℃ |
| 12 |
Yıkama solüsyonu |
20ml (20X)×1şişe |
20ml (30X)×1 şişe |
2-8℃ |
prosedür
Standartların Seyreltilmesi
1. Bir Microelisa şerit plakasında standartlar için on kuyu ayarlanmıştır.Kuyu 1 ve Kuyu 2'de 100μl Standart solüsyon ve 50μl Standart Seyreltme tamponu eklenir ve iyice karıştırılır.Kuyu 3 ve Kuyu 4'te, sırasıyla Kuyu 1 ve Kuyu 2'den 100 ul solüsyon eklenir.Daha sonra 50μl Standart Seyreltme tamponu eklenir ve iyice karıştırılır.Kuyu 3 ve Kuyu 4'ten 50μl solüsyon atılır. Kuyu 5 ve Kuyu 6'da sırasıyla Kuyu 3 ve Kuyu 4'ten 50μl solüsyon eklenir.Daha sonra 50μl Standart Seyreltme tamponu eklenir ve iyice karıştırılır.Kuyu 7 ve Kuyu 8'de, sırasıyla Kuyu 5 ve Kuyu 6'dan 50 ul solüsyon eklenir.Daha sonra 50μl Standart Seyreltme tamponu eklenir ve iyice karıştırılır.Kuyu 9 ve Kuyu 10'da, sırasıyla Kuyu 7 ve Kuyu 8'den 50 ul solüsyon eklenir.Daha sonra 50μl Standart Seyreltme tamponu eklenir ve iyice karıştırılır.50μl solüsyon Kuyu 9 ve Kuyu 10'dan atılır. Seyreltmeden sonra tüm kuyulardaki toplam hacim 50μl'dir ve konsantrasyonlar 120 pg/ml, 80 pg/ml, 40 pg/ml, 20 pg/ml ve 10pg/ml'dir. , sırasıyla
2. Microelisa stripplakasında boş kontrol olarak bir kuyuyu boş bırakın.Numune kuyularına 40μl Sample dilution buffer ve 10μl numune eklenir (seyreltme faktörü 5'tir).Numuneler kuyu duvarına değmeden dibe yüklenmelidir.Hafif sallayarak iyice karıştırın.
3. İnkübasyon: Kapatma plakası membranı ile mühürlendikten sonra 37°C'de 30 dakika inkübe edin.
4. Seyreltme: konsantre yıkama tamponunu damıtılmış suyla seyreltin (96T için 30 kez ve 48T için 20 kez).
5. Yıkama: Kapatma plakası membranını dikkatlice soyun, aspire edin ve yıkama solüsyonunu tekrar doldurun.30 saniye dinlendirdikten sonra yıkama solüsyonunu atın.Yıkama işlemini 5 kez tekrarlayın.
6. Kör kontrol kuyusu dışındaki her kuyucuğa 50 µl HRP-Konjugat reaktifi ekleyin.
7. Adım 3'te açıklandığı gibi inkübasyon.
8. Adım 5'te açıklandığı gibi yıkama.
9. Boyama: Her kuyuya 50 µl Kromojen Solüsyon A ve 50 μl Kromojen Solüsyon B ekleyin, hafifçe çalkalayarak karıştırın ve 37°C'de 15 dakika inkübe edin.Lütfen boyama sırasında ışıktan kaçının.
10. Sonlandırma: reaksiyonu sonlandırmak için her kuyucuğa 50 µl durdurma solüsyonu ekleyin.Kuyudaki renk maviden sarıya değişmelidir.
11. Bir Mikrotiter Plaka Okuyucusu kullanarak 450 nm'de absorbans OD'yi okuyun.Kör kontrol kuyusunun OD değeri sıfır olarak ayarlanır.Durdurma solüsyonu eklendikten sonra test 15 dakika içinde yapılmalıdır.
Kesinlik
Test İçi Kesinlik (Test içinde kesinlik): Düşük, orta ve yüksek seviyeli E2'ye sahip 3 numune sırasıyla bir plaka üzerinde 20 kez test edildi.
Testler Arası Kesinlik (Testler arası kesinlik): Düşük, orta ve yüksek seviye E2'ye sahip 3 numune, her bir plakada 8 tekrar olmak üzere 3 farklı plaka üzerinde test edilmiştir.
CV(%) = SD/ortalamaX100
Test İçi: CV<%10
Testler Arası: CV<12%
Test aralığı
1,8 sayfa/ml -150 sayfa/ml
Mesajınız 20-3.000 karakter arasında olmalıdır!
