BIOVANTION Anti Tiroglobulin Antikor Testi Anti Tg Ab Test Kiti

Anti-Tg ELISA TEST KİTİ Tiroglobulin Ab

1. Kullanım amacı

İnsan serumunda tiroglobuline karşı antikorların in vitro kantitatif tayini için immünoanaliz.Anti-Tg tayini, otoimmün tiroid hastalıklarının tespitinde yardımcı olarak kullanılır.

2. Özet

Tiroglobulin (Tg) tiroid bezinde üretilir ve tiroid folikülünün lümeninin ana bileşenidir.Tiroide özgü peroksidaz (TPO) enzimi ile sinerji içinde Tg, L-tirozinin iyodinasyonunda ve tiroid hormonları T4 ve T3'ün oluşumunda önemli bir işleve sahiptir.Hem Tg hem de TPO potansiyel olarak otoantijeniktir.

Otoimmüniteye dayalı tiroiditi olan kişilerde Tg'ye (Tg-otoantikorları) karşı yüksek serum antikor konsantrasyonları bulunur.Anti-TPO ile birlikte yüksek anti-Tg konsantrasyonları, kronik lenfositik infiltratif tiroiditin (Hashimoto hastalığı) göstergesidir.Tiroglobulin antikorlarının sıklığı, Hashimoto hastalığı da dahil olmak üzere otoimmün tiroiditi olan kişilerde yaklaşık %70-80 ve Graves hastalığı olan kişilerde yaklaşık %30'dur. Ayırıcı tanı için (negatif anti-TPO test sonuçları olan, nedeni bilinmeyen şüpheli otoimmün tiroidit vakaları, lenfositik infiltrasyon olmayan Graves hastalığı ve Tg testinde Tg-otoantikorlarının etkileşimini dışlamak için).

Ek tiroid antikorları (anti-TPO, TSH-reseptör-antikorları) eş zamanlı olarak belirlenerek işlemin duyarlılığı arttırılabilse de, negatif bir sonuç kesin olarak bir otoimmün hastalığın varlığını ekarte etmez.Antikor titresinin seviyesi, hastalığın klinik aktivitesi ile korelasyon göstermez.Başlangıçta yükselen titreler, hastalık daha uzun süre devam ederse veya

remisyon oluşur.Remisyondan sonra antikorlar yeniden ortaya çıkarsa, nüks olasıdır.

Enzim bağlantılı immünosorbent deneyleri, insan antijeni ve tavşan anti-insan IgG antikorlarını (anti-IgG) kullanır.

3.Reaktifler Sağlanan malzemeler

• Kaplamalı Mikroplaka, 8 x 12 şerit, 96 kuyu.İnsan TG antijeni ile önceden kaplanmıştır.

• Kalibratörler, 6 şişe, her biri 1 mL, kullanıma hazır;Konsantrasyonlar: 0(A), 50(B), 150(C), 500(D), 1000(E) ve 2000(F) IU/mL.

• Enzim Konjugatı, 1 şişe, BSA (sığır serum albümini) içeren Tris-NaCl tamponu içinde 11.0 mL HRP (yaban turpu peroksidaz) etiketli tavşan anti-insan IgG antikorları (anti-IgG).%0,1 ProClin300 koruyucu içerir.

• Serum Seyreltici: 1 şişe, 11 mL.Tampon tuzları ve bir boya içeren

• Yıkama Solüsyonu Konsantresi, 1 şişe, 25 ml (40X konsantre), PBS-Tween yıkama solüsyonu.

• Substrat, 1 şişe, 11ml, kullanıma hazır, (tetrametilbenzidin) TMB.

• Durdurma Çözeltisi, 1 şişe, 6.0 ml 1 mol/l sülfürik asit.

• Kullanım Talimatları, 1 kopya.

• Plaka Kapağı: 2 adet.

4. Gerekli (ancak sağlanmayan) malzemeler

• 450nm ve 620nm dalga boyunda emici özelliği olan mikroplaka okuyucu.
• Mikroplaka yıkayıcı.
• kuluçka makinesi.
• Plaka çalkalayıcı.
• %1.5'ten daha iyi bir hassasiyetle 50µl sağlayan mikropipetler ve çok kanallı mikropipetler.
• Emici kağıt.
• Arıtılmış su

5. Test prosedürü

• Test edilecek her kalibratör ve numune için yalnızca gereken sayıda kuyu kullanın ve mikroplaka kuyularını biçimlendirin.

• Her kuyucuğa 100 µL kalibratör ekleyin.

• Kalibratör kuyuları hariç her kuyucuğa 100 µL Sample Diluent (Yeşil renk) ekleyin.

• Her Numune Seyreltici kuyusuna 10 µL Numune ekleyin (NOT: Kuyulardaki Reaktifler Yeşilden Maviye döner), ardından 30 saniye sallayın.

• Plakayı bir plaka kapağı ile kapatın ve 37 °C'de 30 dakika inkübe edin.

• Mikro plakanın içeriğini dekantasyon veya aspirasyon yoluyla atın.Boşaltma yapıyorsanız, plakaya hafifçe vurun ve emici kağıtla kurulayın.

• 350 µL yıkama solüsyonu ekleyin, boşaltın (dokun ve leke) veya aspire edin.Toplam 5 yıkama için 4 kez daha tekrarlayın.Yıkamanın sonunda, plakayı ters çevirin ve kalan yıkama solüsyonunu emici kağıt üzerine hafifçe vurun.

• 100 µL enzim konjugatı ekleyin,

• Plakayı bir plaka kapağı ile kapatın ve 37 °C'de 30 dakika inkübe edin.

• 350 µL yıkama solüsyonu ekleyin, boşaltın (dokun ve leke) veya aspire edin.Toplam 5 yıkama için 4 kez daha tekrarlayın.Yıkamanın sonunda, plakayı ters çevirin ve kalan yıkama solüsyonunu emici kağıt üzerine hafifçe vurun.

• Her kuyucuğa 100 µL Substrat ekleyin.Üzerini örtün ve ortam sıcaklığında (18-25°C) karanlıkta reaksiyon için 10 dakika inkübe edin.Substate ilavesinden sonra plağı sallamayın.

• Her kuyuya 50 µL durdurma solüsyonu ekleyin.

• Kuyuların içindeki sıvının karışması için 15-20 saniye çalkalayın.Mavi rengin tamamen sarıya dönüşmesini sağlamak önemlidir.

• Her kuyunun absorbansını 450 nm'de (kuyu kusurlarını en aza indirmek için referans dalga boyu olarak 620 ila 630 nm kullanarak) bir mikro plaka okuyucuda okuyun.Sonuçlar, durdurma solüsyonu eklendikten sonra 30 dakika içinde okunmalıdır.