Fare İnterferon y;İnterferon gama;IFN-y;IFN-gama;IFNG;ELISA Kiti
Fare serumu, plazma, kültür ortamı veya herhangi bir biyolojik sıvıdaki İnterferon y(IFN-y) konsantrasyonlarının kantitatif in vitro tespiti için.
Prensip
Bu ELISA kiti, yöntem olarak Sandwich-ELISA'yı kullanır.Bu kitte sağlanan Microelisa şerit plakası, IFN-y'ye özgü bir antikorla önceden kaplanmıştır.Standartlar veya numuneler uygun Microelisa stripplate kuyularına eklenir ve spesifik antikorla birleştirilir.Daha sonra, IFN-y'ye özgü bir Horseradish Peroxidase (HRP)- konjuge antikoru, her Microelisa stripplate kuyusuna eklenir ve inkübe edilir.Serbest bileşenler yıkanır.TMB substrat solüsyonu her kuyuya eklenir.Yalnızca IFN-y ve HRP konjuge IFN-y antikoru içeren kuyucukların rengi mavi görünecek ve durdurma solüsyonunun eklenmesinden sonra sarıya dönecektir.Optik yoğunluk (OD), 450 nm dalga boyunda spektrofotometrik olarak ölçülür.OD değeri, IFN-y konsantrasyonu ile orantılıdır.Örneklerin OD'sini standart eğriyle karşılaştırarak örneklerdeki IFN-y konsantrasyonunu hesaplayabilirsiniz.
Kitle birlikte verilen malzemeler
| |
Kitle birlikte verilen malzemeler |
48 tespit |
96 tespit |
Depolamak |
| 1 |
Kullanım kılavuzu |
1 |
1 |
RT |
| 2 |
Kapatma plakası membranı |
2 |
2 |
RT |
| 3 |
Mühürlü çantalar |
1 |
1 |
RT |
| 4 |
Mikroelisa şerit plakası |
1 |
1 |
2-8℃ |
| 5 |
Standart270pg/ml |
0.5ml × 1 şişe |
0.5ml × 1 şişe |
2-8℃ |
| 6 |
Standart seyreltici |
1.5ml × 1 şişe |
1.5ml × 1 şişe |
2-8℃ |
| 7 |
HRP-Konjugat reaktifi |
3ml × 1 şişe |
6ml × 1 şişe |
2-8℃ |
| 8 |
Örnek seyreltici |
3ml × 1 şişe |
6ml × 1 şişe |
2-8℃ |
| 9 |
Kromojen Çözümü A |
3ml × 1 şişe |
6ml × 1 şişe |
2-8℃ |
| 10 |
Kromojen Çözeltisi B |
3ml × 1 şişe |
6ml × 1 şişe |
2-8℃ |
| 11 |
Çözümü Durdur |
3ml × 1 şişe |
6ml × 1 şişe |
2-8℃ |
| 12 |
Yıkama solüsyonu |
20ml (20X)×1şişe |
20ml (30X)×1 şişe |
2-8℃ |
- Standartların Seyreltilmesi
Bir Microelisa şerit plakasında standartlar için on kuyu ayarlanmıştır.Kuyu 1 ve Kuyu 2'de 100μl Standart solüsyon ve 50μl Standart Seyreltme tamponu eklenir ve iyice karıştırılır.Kuyu 3 ve Kuyu 4'te, sırasıyla Kuyu 1 ve Kuyu 2'den 100 ul solüsyon eklenir.Daha sonra 50μl Standart Seyreltme tamponu eklenir ve iyice karıştırılır.Kuyu 3 ve Kuyu 4'ten 50μl solüsyon atılır. Kuyu 5 ve Kuyu 6'da sırasıyla Kuyu 3 ve Kuyu 4'ten 50μl solüsyon eklenir.Daha sonra 50μl Standart Seyreltme tamponu eklenir ve iyice karıştırılır.Kuyu 7 ve Kuyu 8'de, sırasıyla Kuyu 5 ve Kuyu 6'dan 50 ul solüsyon eklenir.Daha sonra 50μl Standart Seyreltme tamponu eklenir ve iyice karıştırılır.Kuyu 9 ve Kuyu 10'da, sırasıyla Kuyu 7 ve Kuyu 8'den 50 ul solüsyon eklenir.Daha sonra 50μl Standart Seyreltme tamponu eklenir ve iyice karıştırılır.50μl solüsyon Kuyu 9 ve Kuyu 10'dan atılır. Seyreltmeden sonra tüm kuyulardaki toplam hacim 50μl'dir ve konsantrasyonlar 180 pg/ml, 120pg/ml, 60 pg/ml, 30pg/ml ve 15 pg/ml'dir, sırasıyla.
Sonuçların Hesaplanması
Fare IFN-y Standardının bilinen konsantrasyonları ve buna karşılık gelen okuma OD'si, sırasıyla log ölçeğinde (x ekseni) ve log ölçeğinde (y ekseni) çizilir.Numunedeki Fare IFN-y konsantrasyonu, numunenin OD'si Y ekseni üzerinde çizilerek belirlenir.Orijinal konsantrasyon, seyreltme faktörü çarpılarak hesaplanır.
Kesinlik
Test İçi Kesinlik (Test içinde kesinlik): Düşük, orta ve yüksek seviyeli Fare IFN-y içeren 3 numune, sırasıyla bir plaka üzerinde 20 kez test edildi.
Testler Arası Kesinlik (Testler arası kesinlik): Düşük, orta ve yüksek seviyeli Fare IFN-y'li 3 numune, her plakada 8 tekrar olmak üzere 3 farklı plaka üzerinde test edilmiştir.
CV(%) = SD/ortalamaX100
Test İçi: CV<%10
Testler Arası: CV<12%
Test aralığı
3pg/ml-200 pg/ml
Duyarlılık:
0.8pg/ml
Mesajınız 20-3.000 karakter arasında olmalıdır!
