• Reaktörleri hazırlayın: Konsantre Yıkama tamponu (20×) 19 adet damıtılmış su ile seyreltilmeli ve iyice karıştırılmalıdır.
• Örnekler ekleyin: Folye poşetini açın ve Mikroplatı çıkarın. 1 kuyu boş olarak, 2 kuyu negatif kontrol olarak, 2 kuyu pozitif kontrol olarak ayarlayın. 50μL Örnek Seyrelticisi dağıttıktan sonra,50μL örnek veya negatif kontrol veya pozitif kontrolü ilgili kuyulara dağıtın.Plağı hafifçe titreştiriyorum.
• Inkubasyon: Mikroplatı plaka kapağı ile kapatın ve kaplı mikroplatı termostat kontrolü bir su banyosunda veya 37°C'de bir mikroplat inkubatöründe 60 dakika inkubasyon yapın.
• Plağı yıkayın: Plağın kapağını çıkarın. Tüm kuyuların içeriğini aspirasyon yapın. Kuyuları seyreltilmiş yıkama tamponuyla doldurun (suya batırmak için 10 ~ 20 saniye) ve sonra tekrar aspirasyon yapın.Prosedürü 5 kez tekrarlayın.Dinlenme hacminin asgari olduğundan emin olun, absorbent kağıda plaka vurarak.
• Konjugat ekleyin: Her kuyunun içine 100μL konjugat ekleyin (boş kuyunun haricinde).
• Inkubasyon: Mikroplatı kapatın ve 37°C' de 30 dakika inkubasyon yapın.
• Plağı yıkayın: 4. adımda olduğu gibi yıkama işlemini tekrarlayın.
• Substrat ekle: Her kuyunun içine 50μL Substrat çözeltisi A ve 50μL Substrat çözeltisi B ekleyin, iyice karıştırın, kapayın ve 30 dakika boyunca 37°C'de küvetleyin.
• Durdurma reaksiyonu: Her kuyunun içine 50μL durdurma çözeltisi ekleyin ve iyice karıştırın.
• 450 nm'de emilim ölçülür. İki dalga boyutu ölçümü kullanılırsa, referans dalga boyu 620nm ile 690nm arasında seçilmelidir.

Önlemler

• Kullanmadan önce tüm kit bileşenlerinin oda sıcaklığına gelmesine izin verin.
• Reaksiyon sıcaklığını ve zamanını sıkı bir şekilde kontrol etmek için yönlendirme eklemesini takip edin.
• Farklı parti numaralarının bileşenlerini karıştırmayın.
• Kit, 2- 8°C' de saklanmalıdır.