MPXV PCR Maymun Çene Virüsü Dondurma Kurutulmuş Multipleks Gerçek Zamanlı PCR Algılama

Operasyon Prosedürü

1) Nükleik Asit Ekstraksiyonu Uygun bir ekstraksiyon kiti kullanarak numunelerden DNA çıkarın.Ekstraksiyonun son aşamasında nükleik asidin yaklaşık 100 μl elusiyon tamponu (TE veya nükleazsız H2O) ile elüte edilmesi önerilir.Temizlenmiş nükleik asit hemen kullanılmalı veya -20°C' de saklanmalıdır.

2) Pozitif kontrol hazırlığı Pozitif kontrol, rehidrasyon öncesinde 12 aya kadar ortam sıcaklığında saklanabilir.Kullanımdan önce 250 μl TE tamponu veya nükleazsız H2O ekleyerek yeniden hidratlanmalıdır., 15-20 saniye boyunca düşük hızda girdaplanmış ve 15-20 saniye boyunca düşük hızda santrifüje edilmiştir.

3) Gerçek Zamanlı RT-PCR Karıştırma Hazırlaması

A) Vakum paketini açın ve rejanstı içeren 8 tüplü şeritleri çıkarın.Eğer sağlanan tüpler aletinizle uyumlu değilseRejanstürü aletinizle uyumlu bir optik tüpün içine aktarın.

B) Tüpleri açın ve kapağı atın (gerçek zamanlı PCR makineleri için uygun değil) ve reaksiyon karışımını buz üzerinde aşağıdaki gibi hazırlayın.

* Nükleazsız su negatif kontrol olarak kullanılabilir.

C) Tüpleri optik kapaklarla veya 96 kuyu plaka ile optik mühürleme filmiyle kapatın (temizlenmemiştir).

D) Tüpleri düşük hızda 10 ~ 15 saniye boyunca döndürün ve 3000 rpm'de 20 saniye boyunca santrifuge edin ve gerçek zamanlı bir PCR cihazına yerleştirin.

3) RT-PCR Ayarlama: Reaksiyon hacmini 25μl olarak ayarlayın ve PCR amplifikasyon prosedürünü aşağıdaki gibi yapın.ROX (Orf1ab için) ve CY5 (RNase P geni için) 60 °C'de floresans, ve pasif referans olarak NONE seçin.
4) Sonuç Analizi ve Yorumu Enstrümanın talimatlarına göre sınır çizgisini belirleyin.

A) Kalite kontrolü:

B) Örnek sonucu yorumlanması

Teknik parametreler: