İnsan Serbest Heme RUO ELISA Assay Kit RESEARCH Sadece tıbbi teşhis için kullanılır

Amaç:

Bu kit, tam kan içindeki serbest hem konsantrasyonlarının belirlenmesini sağlar.

Testin prensibi

Örnekte insan serbest hem seviyesi test kitinde, temiz insan serbest hem antikorunu mikrotiter plaka kuyularını kaplamak için kullanın, katı fazlı antikor yapın, sonra kuyulara serbest hem ekleyin,HRP etiketlenmiş kombinasyonlu serbest hem antikorları, antikor-antijen-enzim-antikor kompleksi haline gelir, yıkadıktan sonra Tamamen, TMB substrat çözeltisi ekleyin, TMB substrat mavi renk olur HRP enzim katalize,reaksiyon kükürt asidi çözeltisi eklenerek sona erdirilir ve renk değişikliği 450 nm dalga boyunda spektrophotometrically ölçülürDaha sonra örneklerdeki insan serbest hem konsantrasyonu, örneklerin O.D.'sini standart eğriyle karşılaştırarak belirlenir.

Teknik parametreler:

Kit ile birlikte verilen malzemeler:

Örnek şartları

• Örnek toplandıktan sonra mümkün olan en kısa sürede ve ilgili literatüre göre çıkarılmalı ve çıkarıldıktan sonra mümkün olan en kısa sürede deney yapılmalıdır.numune -20 °C'de muhafaza edilebilir.Tekrarlanan dondurma- çözme döngülerinden kaçının.
• NaN3 içeren numuneyi tespit edemiyoruz çünkü NaN3 HRP aktifini inhibe ediyor.

Denetim prosedürü

• Sıvılat ve numune ekle:Sıvılat Asıl yoğunluk Standartı aşağıdaki tabloda:

2Örnek ekleyin: Boş kuyulara ayrı ayrı yerleştirin (boş karşılaştırma kuyulara örnek ve HRP-Conjugate rejansi eklenmez, diğer her adım işlem aynıdır). test örneği kuyusu.50μl standartı Microelisa stripplate'a ekleyin.Test örneği kuyusuna 40μl örnek seyreltilmesi ekleyin, daha sonra test örneği 10μl ekleyin (örnek son seyreltilmesi 5 kattır), örneği kuyulara ekleyin, mümkün olduğunca kuyunun duvarına dokunmayın ve dikkatlice karıştırın.

3Inkubasyon: Kapalı plaka zarıyla kapattıktan sonra, 37°C'de 30 dakika inkubasyon yapılır.

4.Sıvı yapılandır: 30 (veya 20) katlı yıkama çözeltisi, 30 (veya 20) katlı damıtılmış su ve rezerv ile seyreltilmiştir.

5Yıkama:Kapatma plaka zarını, atın sıvı, sallayarak kurut, her kuyunun yıkama tamponunu ekleyin, 30 saniye kalın sonra boşaltın, 5 kez tekrarlayın, patlayarak kurut.

6.enzim ekleyin:HRP-Konjügat Reagent 50μl'i boş kuyudan başka her kuyuya ekleyin.

7İnkubatör: 3 ile çalış.

8Yıkama: 5 ile çalıştırılır.

9.color:Her kuyunun içine Chromogen Solution A 50ul ve Chromogen Solution B 50ul ekleyin, 37°C'de 10 dakikalığına ışık korumasından kaçının.

10Reaksiyonu durdurun:Her kuyunun içine Stop Solution50μl ekleyin, Reaksiyonu durdurun ((mavi renk sarıya değişir).

11Test: sıfır değerinde boş çukur alınır, 450nm'de emilim ölçülür ve 15 dakika içinde çözeltinin durdurulmasını sağlar.

Hesaplayın.

Standart yoğunluğu yatay olarak alın, dikey için OD değeri, standart eğriyi grafik kağıdına çizin,Örnek OD değerine göre örnekleme eğrisi ile karşılık gelen yoğunluğu bulun, seyreltme katına çarpılır veya standart yoğunluk ve OD değeri ile standart eğrinin düz çizgi regresyon denklemini hesaplar, denklemdeki numune OD değeri ile,Örnek yoğunluğunu hesaplayın., seyreltme faktörüne çarpılırsa sonuç örneklemin gerçek yoğunluğudur.