VCAM-1 RUO Elisa Kit İnsan Vaskuler Endotel Hücre Yapışması Molekülü 1

Ürün Tanımı:

Amaç

Bu kit, VCAM-1 konsantrasyonlarının insan serumunda, hücre kültürü süpernatlarında ve diğer biyolojik sıvılarda belirlenmesini sağlar.

Testin prensibi

Kit, numunede insan VCAM-1 seviyesini ölçer. Temiz insan VCAM-1 antikorunu mikrotiter plaka kuyularını kaplamak için kullanır, katı fazlı antikor yapar, sonra kuyulara VCAM-1 ekler.HRP etiketlenmiş kombine VCAM-1 antikorları, antikor-antijen-enzim-antikor kompleksi haline gelir, yıkadıktan sonra Tamamen, TMB substrat çözeltisi ekleyin, TMB substrat mavi renk olur HRP enzim katalize,reaksiyon kükürt asidi çözeltisi eklenerek sona erdirilir ve renk değişikliği 450 nm dalga boyunda spektrophotometrically ölçülürÖrneklerdeki İnsan VCAM-1 konsantrasyonu daha sonra örneklerin O.D.'sini standart eğriyle karşılaştırarak belirlenir.

Kit ile birlikte verilen malzemeler

Teknik parametreler:

Örnek şartları

• Örnek toplandıktan sonra mümkün olan en kısa sürede ve ilgili literatüre göre çıkarılmalı ve çıkarıldıktan sonra mümkün olan en kısa sürede deney yapılmalıdır.numune -20 °C'de muhafaza edilebilir.Tekrarlanan dondurma- çözme döngülerinden kaçının.
• NaN3 içeren numuneyi tespit edemiyoruz çünkü NaN3 HRP aktifini inhibe ediyor.

Denetim prosedürü

• Sıvılat ve numune ekle:Sıvılat Asıl yoğunluk Standartı aşağıdaki tabloda:

2. Örnek ekleyin: Boş kuyulara ayrı ayrı yerleştirin (boş karşılaştırma kuyulara örnek ve HRP-Conjugate rejansi eklenmez, diğer her adım işlem aynıdır). test örneği kuyusu.50μl standartı Microelisa stripplate'a ekleyin., test örneği kuyusuna 40μl örnek seyreltilmesi ekleyin, daha sonra test örneği 10μl ekleyin (örnek son seyreltilmesi 5 kattır), kuyulara örnek ekleyin, mümkün olduğunca kuyunun duvarına dokunmayın ve nazikçe karıştırın.

3Inkubasyon: Kapalı plaka zarıyla kapattıktan sonra, 37°C' de 30 dakika inkubasyon yapılır.

4. Sıvıyı yapılandırın: 30 (veya 20) katlı yıkama çözeltisi 30 (veya 20) katlı damıtılmış su ve rezerve ile seyreltilmiştir.

5. Yıkama: Kapama plaka zarını açın, sıvıyı atın, sallayarak kurutun, her kuyunun yıkama tamponunu ekleyin, 30 saniye kalın sonra boşaltın, 5 kez tekrarlayın, patlayarak kurutun.

6Enzim ekleyin: Boş kuyudan başka her kuyunun içine 50μl HRP-Konjugate rejansi ekleyin.

7İnkubatör: 3'te operasyon.

8- Yıkama: 5 ile operasyon.

9Renk: Her kuyunun içine Chromogen Solution A 50ul ve Chromogen Solution B 50ul ekleyin, 37°C'de 10 dakika ışık korumasından kaçının.

10Reaksiyonu durdurun: Her kuyunun içine Stop Solution50μl ekleyin, Reaksiyonu durdurun ((mavi renk sarıya değişir).

11. Test: sıfır olarak boş kuyudan alın, 450nm'de emilim değerini okuma Stop Solüsyon ekledikten sonra ve 15 dakika içinde

Hesaplayın.:

Standart yoğunluğu yatay olarak alın, dikey için OD değeri, standart eğriyi grafik kağıdına çizin,Örnek OD değerine göre örnekleme eğrisi ile karşılık gelen yoğunluğu bulun, seyreltme katına çarpılır veya standart yoğunluk ve OD değeri ile standart eğrinin düz çizgi regresyon denklemini hesaplar, denklemdeki numune OD değeri ile,Örnek yoğunluğunu hesaplayın., seyreltme faktörüne çarpılırsa sonuç örneklemin gerçek yoğunluğudur.